Existe-t-il un protocole de congélation des cellules bactériennes dans le glycérol uniquement?

Bien sûr, facile comme tarte! C’est le genre de chose qui, en fait, est si facile que la plupart des gens n’ont pas de protocole écrit pour cela, ce qui explique probablement pourquoi vous avez du mal à en trouver un. 🙂

Pour la plupart des souches bactériennes – mon expérience concerne E. coli , surtout – il existe des espèces où les stocks de glycérol ne fonctionnent pas aussi bien, mais vous devriez consulter quelqu’un qui travaille avec votre espèce d’intérêt, pour savoir ce qui fonctionne le mieux pour eux .

Pour E. coli , utiliser soit une culture de nuit (cultivée dans les bonnes conditions – ce sera généralement LB avec tous les antibiotiques nécessaires à 37C, mais peut varier en fonction des besoins de croissance de votre souche – ou quelques boucles de cellules bactériennes prélevées Ajoutez du glycérol – vous recherchez une concentration finale de glycérol d’environ 20% (la quantité que vous ajoutez dépendra donc de vos volumes et de la concentration de glycérol). Utilisez une bonne technique aseptique. cryotube et étiqueté correctement – pop dans le congélateur -80 C. Assurez-vous que vous avez un dossier clair de ce que votre génotype de souche est et où il est stocké.

Pour récupérer les cellules de ce stock congelé, sortez le tube du congélateur, ouvrez-le et touchez un cure-dent stérile, une boucle ou un embout de pipette à la masse gelée des cellules. Essayez de gratter suffisamment de cellules pour que vous puissiez voir un peu de matériel sur la pointe de votre dispositif d’inoculation – mais même si vous ne pouvez pas le voir, vous avez probablement plus que suffisamment de cellules. Encore une fois en utilisant une technique aseptique, inoculer le milieu de culture approprié avec vos cellules. Évitez le gel / dégel excessif du tube de stockage – il devrait être directement dans et hors du congélateur -80C sans temps pour commencer à décongeler.